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原代細胞的培養方法

來(lái)源:萬(wàn)物生物   發(fā)布時(shí)間:2020-10-09

原代細胞最接近和最能反映體內生長(cháng)特性,適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實(shí)驗研究。

  原代細胞的培養,也叫初代培養,是從供體取得組織細胞在體外進(jìn)行的首次培養,是建立細胞系的第一步,是一項基本技術(shù)。

  原代細胞的培養方法一般有以下4種:

 ?、?組織塊培養法

  組織塊培養是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著(zhù)于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長(cháng)。

 ?、?消化培養法

 ?、?懸浮細胞培養法

  對于懸浮生長(cháng)的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養。

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  器官培養是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養,器官培養可保持器官組織的相對完整性,可用于重點(diǎn)觀(guān)察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調節作用。

  原代細胞的培養條件:

  一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養

  1、細胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;

  2、細胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;

  3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養;

  4、 胎牛血清濃度為10%-80%;

  5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養;

  6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;

  7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液;

  8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養1周時(shí),應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

  二、懸浮細胞培養

  1、原代培養時(shí)要盡量去除紅細胞;

  2、短期培養,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進(jìn)行;

  3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進(jìn)行分瓶試驗;

  4、長(cháng)期培養時(shí),淋巴細胞中要加入生長(cháng)因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長(cháng);

  5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;

  6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。

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