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支原體檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)

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貨號:
FKU018
產(chǎn)品規格:
20T
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產(chǎn)品詳情 操作說(shuō)明 注意事項

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱(chēng)

產(chǎn)品編號

規格

支原體檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)

FKU018

20T



產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本支原體檢測試劑盒是利用支原體中特有酶的活性設計而成,該酶可將支原體檢測試劑中特有的底物分解同時(shí)將ADP轉換成ATP,螢光素酶在A(yíng)TP存在下催化螢光素氧化發(fā)出生物螢光,可通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)進(jìn)行測定,以反應待檢樣品是否存在支原體污染。整個(gè)檢測過(guò)程操作簡(jiǎn)單,只需兩個(gè)步驟,耗時(shí)約15 min。該方法靈敏度高,檢測的是真正具有生物活性的支原體,所以檢測結果比PCR方法更準確。



儲存與運輸

冰袋(wet ice)運輸;-20℃保存,支原體檢測試劑A需避光保存;有效期12個(gè)月。

組成

Component Number

Component

G1901-20T

G1901-1

支原體檢測試劑A

1 mL

G1901-2

支原體檢測試劑B

1 mL

說(shuō)明書(shū)

1份



操作步驟

1. 取適量(1 mL足夠)培養3-6天的細胞上清,400 g離心3 min,以去除沉淀少量漂浮細胞或碎片,取上清立即檢測,或者4℃保存在一周內檢測,或者-80℃保存半年內檢測;

2. 將所有檢測試劑和檢測樣品均平衡至室溫,最適宜的溫度為20-25℃;

3. 在96孔檢測板(非透明板,建議用專(zhuān)用96孔白板)中加入50 μL待檢測樣品、陰性對照(如無(wú)菌水或PBS);

4. 加入50 μL支原體檢測試劑A,輕柔混勻不要產(chǎn)生氣泡,室溫(20-25℃)避光放置5 min。然后用具有檢測化學(xué)發(fā)光的酶標儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測,計讀數為A。(請根據儀器靈敏度適當調整相應的參數,每個(gè)孔的檢測時(shí)間一般為0.25-1 s);

5. 加入50 μL的支原體檢測試劑B,輕柔混勻不要產(chǎn)生氣泡,室溫(20-25℃)避光放置10 min。然后用具有檢測化學(xué)發(fā)光的酶標儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測,計讀數為B。(注:請嚴格按照加入支原體檢測試劑B后10 min進(jìn)行檢測,不應提前或延后,否則會(huì )影響結果判斷);

6. 計算比值(Ratio)=讀值B/讀值A。

A. 如果B/A>1.1,說(shuō)明細胞培養物中存在支原體污染;

B. 如果B/A<0.9,說(shuō)明細胞培養物中沒(méi)有支原體污染;

C. 如果B/A比值在0.9-1.1之間,建議繼續培養細胞24-48 h后,再次檢測確定是否存在支原體污染。如果B/A比值仍在0.9-1.1之間,則該細胞培養物沒(méi)有支原體污染,為支原體陰性。



注意事項

1. 支原體檢測試劑A中含有螢光素酶,反復凍融會(huì )逐漸使其失活,建議第一次解凍后應適當分裝保存,分裝容器需潔凈無(wú)污染。

2. 檢測時(shí)強烈建議使用白色或者黑色不透光96孔板,使用普通透明96孔板會(huì )使得相鄰檢測孔出現干擾。

3. 人體皮膚表面含有豐富的ATP,檢測時(shí)請帶好實(shí)驗手套、口罩,其他耗材也應潔凈、無(wú)污染,防止外源引入ATP污染。

4. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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