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RIPA裂解液(弱)

價(jià)格: 在線(xiàn)咨詢(xún)
貨號:
S0921K50
產(chǎn)品規格:
100ml
購買(mǎi)數量:
產(chǎn)品詳情 操作說(shuō)明 注意事項

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞及組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解組織、細胞得到的蛋白樣品可以用于常規的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation, IP)、免疫共沉淀(CO-IP)等實(shí)驗。RIPA裂解液有很多配方,按其裂解效果主要分為強,中,弱三種。本裂解液為RIPA弱裂解液,其主要成分為:50 mM Tris-HCl (pH 7.4),150 mM NaCl,1 mM EDTA-2Na2,0.25% Sodium deoxycholate,和1% NP-40。本產(chǎn)品適用于動(dòng)物或植物組織及細胞樣品,也可用于真菌或細菌樣品。


儲存與運輸

冰袋(wet ice)運輸;4℃避光保存,有效期12個(gè)月。



使用方法

自備蛋白酶抑制劑。RIPA裂解液(弱)在臨用前需加入蛋白酶抑制劑,防止蛋白降解。以下使用方法中提到的RIPA裂解液(弱)均指已添加蛋白酶抑制劑。

對于組織樣品:

1. 組織塊用預冷PBS洗滌,去除血污,剪成細小碎塊置于勻漿器中。

2. 加入10倍組織體積RIPA裂解液(弱)低溫勻漿。注意,RIPA裂解液(弱)的使用量可按照約每50 mg組織與1 mL裂解液的比例添加。如組織蛋白含量較低,可降低裂解液的用量,以提高粗提溶液中的蛋白濃度。

3. 將勻漿液轉移至1.5 mL離心管中,振蕩。冰浴30 min,期間每10 min用移液器反復吹打,確保組織細胞完全裂解。

4. 12000 g離心5 min,收集上清,即為總蛋白溶液。

對于貼壁細胞樣品:

1. 用PBS清洗細胞2-3次,最后一次徹底吸干殘留液。

2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例吸取RIPA裂解液(弱)于細胞培養板、瓶?jì)?,反復晃?dòng)培養板、瓶,使裂解液與細胞充分接觸3-5 min。

3. 用細胞刮刀將細胞刮下,收集到離心管中。

4. 12000 g離心5 min,收集上清,即為總蛋白溶液。

對于懸浮細胞樣品

1. 離心收集細胞。

2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例將細胞液與RIPA裂解液(弱)混合,振蕩。

3. 冰浴30 min,期間每10 min用移液器反復吹打數次,確保細胞完全裂解。

4. 12000 g離心5 min,收集上清,即為總蛋白溶液。

對于細菌或真菌樣本:

1.取1 mL菌懸液,離心去上清,PBS洗滌一次,充分去除液體。渦旋使菌體盡量分散。

2.加入100-200 μL RIPA裂解液(弱),輕輕渦旋使菌體與裂解液充分混勻。

3.冰浴10 min,期間每2 min用移液器反復吹打數次,確保菌體完全裂解。

4.12000 g離心5 min,收集上清,即為總蛋白溶液。

注意事項

1. 組織或細胞裂解時(shí)可能會(huì )出現粘稠狀??捎靡埔浩鞣磸痛荡蚧驕u旋儀振蕩,直至呈液狀為止。如果一直較稠,可再加入適量裂解液。

2. 本試劑不含有蛋白酶抑制劑,需自備蛋白酶抑制劑并在臨用前加入。

3. 操作時(shí)請穿實(shí)驗服,并佩戴一次性手套。


本產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!

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