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NCI-H660 人神經(jīng)內分泌前列腺癌細胞

價(jià)格: 在線(xiàn)咨詢(xún)
貨號:
tings-1618248
產(chǎn)品規格:
1*10?6
購買(mǎi)數量:
產(chǎn)品詳情 操作說(shuō)明 注意事項

細胞介紹

該細胞來(lái)源于63歲成年高加索地區男性的前列腺癌細胞在淋巴結的轉移灶。

細胞特性

1) 來(lái)源:前列腺癌,淋巴結轉移

2) 形態(tài):上皮細胞樣,懸浮生長(cháng),少量貼附。

3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;

(2)存活細胞,收到后應繼續生長(cháng),傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

(3)收到細胞后請拍照,3天內如果發(fā)現污染,請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途:僅供科研使用。

細胞接收后的處理:

1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養瓶的狀況,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2) 在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)時(shí),最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下,同時(shí)給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為細胞需要售后時(shí)提供收到細胞時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3) 觀(guān)察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4) 貼壁細胞:在運輸過(guò)程中貼壁細胞會(huì )有脫落的現象,如發(fā)現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長(cháng),可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。

5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基)。

6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議1:2傳代 。 

細胞培養步驟

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備RPMI-1640培養基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,5%;添加0.005 mg/ml 胰島素,0.01 mg/ml 轉鐵蛋白,30nM 亞硒酸鈉,10 nM 氫化可的松,10 nM beta-雌二醇 ,2mM L-谷氨酰胺;雙抗,1%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養,補加培養基至6ml。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%,即可進(jìn)行傳代培養。

1. 將細胞懸液按1:2到1:5比例分到新皿中或者瓶中,補加培養基至6ml,放入培養箱繼續培養。

3)細胞培養:隨著(zhù)細胞數量的增加添加培養基來(lái)維持細胞的生長(cháng),輕搖培養瓶可使附著(zhù)細胞重新懸浮。單個(gè)細胞容易死亡,成團(成簇)細胞更容易生長(cháng),當細胞生長(cháng)過(guò)程中出現數量很多懸浮的細胞(團)時(shí) 要進(jìn)行傳代。

4)細胞凍存:待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。

下面T25瓶為例;

1,細胞凍存時(shí),取上清,可使用血球計數板計數。

2,4min ,1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。

3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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