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Recombinant TEV Protease (His-tag)

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貨號:
S0921K127
產(chǎn)品規格:
5000 U
購買(mǎi)數量:
產(chǎn)品詳情 操作說(shuō)明 注意事項

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本產(chǎn)品Recombinant TEV Protease是在大腸桿菌中重組表達帶His標簽(His-tag)的煙草蝕紋病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶。TEV Protease是一種常用的半胱氨酸蛋白酶,能特異性地識別七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser(E-N-L-Y-F-Q-G/S),并在Gln(Q)和Gly/Ser(G/S)氨基酸殘基之間進(jìn)行酶切。Recombinant TEV Protease最適酶切溫度為30℃,在29-34℃范圍均有較高的酶活性,但當溫度達到或高于37℃時(shí),其酶活性會(huì )急劇下降。在實(shí)際操作過(guò)程中,為盡量保留目的蛋白結構和生物活性,建議在4℃用TEV Protease酶切過(guò)夜。Recombinant TEV Protease在pH 6.0-9.0范圍內具有活性,而當pH小于或等于5時(shí),會(huì )失去酶活性。TEV Protease在400 mM咪唑中仍有較高活力,因此對于使用鎳柱純化含有His標簽目的蛋白,可直接將TEV Protease加入含高濃度咪唑的純化的目的蛋白溶液中,在4℃透析去除咪唑同時(shí)進(jìn)行酶切,也可以在透析后再用TEV Protease進(jìn)行酶切以去除His標簽。經(jīng)過(guò)酶切后目的蛋白溶液中帶有His標簽的TEV Protease以及切除的His標簽,都可以通過(guò)與鎳柱結合而去除。

應用:常用于去除融合蛋白中MBP、GST、His或其他標簽蛋白。Recombinant TEV Protease本身帶有His標簽可以與鎳柱結合。

來(lái)源:煙草蝕紋病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶,大腸桿菌重組表達,含His標簽。

酶活定義:在30℃,pH 8.0條件下,1 h內可以將3 μg底物(含有Recombinant TEV Protease酶切位點(diǎn)的蛋白)切割85%以上所需酶量為一個(gè)酶活單位。

失活或抑制:常見(jiàn)的絲氨酸蛋白酶抑制劑如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin等和EDTA不會(huì )抑制TEV Protease活性。而靶向半胱氨酸殘基的蛋白酶抑制劑如NEM或IAA等,可以顯著(zhù)抑制TEV Protease的酶活力。在較高濃度咪唑中TEV Protease仍保持較高酶活性。

純度及濃度:SDS-PAGE檢測純度≥95%,10 U/μL。

Recombinant TEV protease儲存液:50 mM Tris-HCl,250 mM NaCl,1 mM EDTA,5 mM DTT,50% (v/v) Glycerol,pH 8.0。

10×TEV Buffer:500 mM Tris-HCl,500 mM NaCl,5 mM EDTA,10 mM DTT,pH 8.0。


儲存與運輸

冰袋(wet ice)運輸;-20℃保存,有效期12個(gè)月。


操作步驟

1. 蛋白酶切體系推薦:

Component

Volume

10×TEV Buffer

5 μL

目的蛋白

30 μg

Recombinant TEV Protease (His-tag) (10 U/μL)

1 μL

ddH2O

To 50 μL

2. 將上述反應體系置于30℃反應1-4 h。如果目的蛋白在30℃穩定性不佳,可考慮將反應體系置于4℃過(guò)夜酶切(約16 h左右);

3. 取酶切產(chǎn)物10 μL樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測,可以評估酶切用量和反應條件。


注意事項

1. 酶制品使用時(shí)應放在冰盒內或冰浴,使用完畢后應立即放置于-20℃保存,建議分裝保存;

2. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。


酶切應用實(shí)例


圖片1.png

 


圖1:Recombinant TEV Protease酶切對照底物蛋白(A+B融合蛋白,其中含有Recombinant TEV Protease酶切位點(diǎn))效果圖(酶切條件30℃、pH 8.0,分別酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h,依次對應泳道Lane:1-6,酶切體系中加入底物與酶質(zhì)量比為20:1)。

 

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